非变性质谱分析（Native Mass Spectrometry, Native MS）通过保留生物大分子的天然构象与非共价相互作用，为蛋白质复合物、核酸-蛋白组装体等复杂体系的原位表征提供了独特手段。然而，其技术灵敏度与数据可靠性高度依赖于实验设计与分析策略的优化。以下从样品处理、仪器参数到数据解析的全流程，总结六项关键策略以提升分析准确性。

一、优化样品纯度与缓冲体系

高纯度样品是获得高质量非变性质谱数据的基础。通常要求蛋白质纯度达到90%以上，以减少降解产物和小分子杂质对信号的干扰。可通过尺寸排阻色谱（SEC）或超滤去除杂质，提高样本均一性。缓冲体系方面，推荐使用低浓度（如20-50 mM）的挥发性盐类（如醋酸铵）替代传统非挥发性盐，避免离子抑制。对于膜蛋白复合体，可在低于临界胶束浓度（CMC）的条件下添加两性去垢剂（如DDM、LMNG），同时结合脱盐步骤去除多余去垢剂，确保离子化效率。

二、选择温和电离条件以保护天然构象

温和的电离条件是保证复合体完整性的关键。纳升电喷雾（nano-ESI）以极低流速（一般在几十到几百纳升/分钟范围）实现缓慢离子化，降低蛋白复合体在电离过程中的解离风险。电喷雾电压通常控制在适当范围（约0.8-1.2 kV），避免因电压过高导致电荷态异常升高或复合体解离。对于高分子量复合物，可进一步降低锥孔电压（如十几伏左右）或结合离子淌度技术（如TIMS）辅助分离，以减少碰撞诱导的构象改变。

三、精确质量校准与仪器参数优化

准确的质量校准对于区分质量接近的复合体至关重要。通常选用已知分子量的标准蛋白（如伴刀豆球蛋白A等）进行校准，以修正仪器的系统性偏差。高分辨率质谱（如Orbitrap、FT-ICR-MS）在进行复杂复合体分析时，需要优化离子传输、检测器参数，确保信号稳定且响应线性。此外，采用多次扫描平均（MCA模式）方式，叠加数据以提升低丰度样本的信噪比，增强检测灵敏度。

四、解析电荷态分布以识别构象异质性

电荷态分布反映蛋白质的构象状态。紧凑、稳定的天然构象通常表现为较低电荷态，而部分展开或解折叠蛋白会显示更高电荷态。通过电荷态分布分析工具（如Massign等）对电荷态系列进行拟合，可识别样本中不同构象亚群。例如，若某复合体在与配体结合后，其电荷态分布从高电荷向低电荷转移，提示复合体结构趋于紧凑，从而揭示功能性构象变化。

五、结合互补解离技术验证复合物组成

对于异源复合物（如抗体-药物偶联物），单一质谱数据可能无法明确亚基归属。通过碰撞诱导解离（CID）或表面诱导解离（SID）选择性解离复合物，可获得亚基质量信息。例如，将完整的IgG-抗原复合物解离后，若检测到抗原亚基的质量丢失，可直接验证结合特异性。此外，氢/氘交换（HDX）与离子迁移谱联用，可进一步解析复合物的动态组装路径。

六、整合正交分析方法降低假阳性风险

非变性质谱分析数据需与尺寸排阻色谱-多角度光散射（SEC-MALS）或分析型超速离心（AUC）等正交技术交叉验证。例如，若质谱检测到某复合物分子量为150 kDa，而SEC-MALS显示其流体力学半径与200 kDa标准品一致，可能提示质谱中存在部分解离或非特异性结合。此外，冷冻电镜单颗粒分析可提供高分辨率结构信息，辅助确认复合物的组装模式。

提升非变性质谱分析的准确性需贯穿实验设计、仪器操作与数据分析的全链条。上述策略通过减少干扰因素、优化检测灵敏度、增强数据可靠性，为解析生物大分子的原位相互作用提供了保障。百泰派克生物科技提供准确且快速的分析服务，获国家CNAS实验室认可，助力研究人员全面理解相关内容。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

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